如何检测引物的纯度？？
如何检<爱尬聊_健康养生>测引物的纯度？
音乐之光2018 2021-08-22 03:22
实验室方便的做法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳。取0.2-0.5OD的引物，用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和，上样前加热变性(95℃,2mins)。加入尿素的目的一是变性，二是增加样品比重，容易加样。600V电压进行电泳，一定时间后(约2-3小时)，剥胶，用荧光TLC板在紫外灯下检测带型，在主带之下没有杂带，说明纯度是好的。如果条件许可，也可以用银染方式染色。
始终还是遗憾 2021-08-22 03:27
这个可以直接观察核酸的整条曲线，那比光靠260,280两个吸收值，肯定要准确很多。可以跑一下琼脂糖凝胶电泳，如果上下游引物亮度差很多，则可能是引物有问题。
_WeCh****78463 2021-08-22 03:38
除了常见的PAGE还有以下方法：
高效液相色谱 (HPLC)
以离子交换树脂为填充料，可以非常有效的检测出N-1或N-2短片段。
毛细管凝胶电泳(CGE)
基于尺寸排阻机理，可实现单核苷酸分离，可用于测定寡核苷酸纯度，分辨率高，定量准确。
质谱分析 (MS)
MS是用电场和磁场将运动的离子按它们的质荷比分离后进行检测的方法。
